ELISA定量方法的類型和構架從事生物藥研發(fā)的你，不可不知的ELISA開發(fā)方法|干貨滿滿！快來看看ELISA在生物藥研發(fā)中的直接法實驗方案吧！

ELISA定量方法的類型和構架前言

ELISA在生物**研發(fā)的各個環(huán)節(jié)均有廣泛的應用：

如以生物大分子檢測為目的，在藥效藥代評估時，對動物實驗和臨床實驗中的血液樣品的**濃度和生物大分子標志物進行定量檢測；

以親和力測定為目的，在質(zhì)量分析過程中，對抗體相對于靶點抗原的親和力檢測；

以親和力篩選為目的，在抗體發(fā)現(xiàn)過程中，對雜交瘤細胞克隆上清分泌抗體相對于靶點抗原的親和力大小進行區(qū)分等。

使用目的不同，則需要選取不同特性試劑耗材。

參差多態(tài)方顯世界精彩，ELISA方法學開發(fā)也是一個道理。

本篇為ELISA方法開發(fā)構建的的幾大實例之一——生物大分子檢測的定量方法開發(fā)的具體實驗方案，適用于所有初接觸ELISA方法技術且有志于進行ELISA方法開發(fā)建立的同仁。

ELISA定量方法的類型和構架

采用ELISA技術進行定量的平臺化方法——一般來說可以分為兩類，即間接法和直接法。

間接法也稱為競爭法，直接法也稱雙抗夾心法。

今天，我們重點為大家介紹直接法。

直接法以定量抗原為例：

首先，以與抗原有強親和力的抗體包被固定在酶標板材上，加入抗原標準品/樣品反應，再加入與抗原有強親和力的抗體并且偶聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應，*后加入酶對應的底物顯色，中間通過洗滌去除反應體系中未結(jié)上的試劑成分。

這樣信號大小和抗原的濃度成正相關，隨著反應的進行酶標板材上固定的成分由抗體，轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原，*后變?yōu)榭贵w-抗原-酶聯(lián)抗體，待測的抗原處于兩個抗體之間，所以也稱為雙抗夾心法。

雙抗夾心法有一個關鍵點：待檢測的物質(zhì)（如抗原）必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個結(jié)合位點，這兩個位點可以是抗原上兩個以上相同的結(jié)構位點，也可以是不同的結(jié)構位點。

一般來說，Elisa的構架由標準品，內(nèi)控品，空白對照，基質(zhì)對照和待測樣品組成。

標準品
根據(jù)實驗的具體應用方向來源，標準品可以是已知濃度的國際/國家標準品或者商業(yè)化的已知濃度的蛋白分子，也可以是自制的以其他方式定量（如紫外吸收定量）的純度較高的蛋白分子。標準品一般為7-8個濃度點，擬合成合適的濃度-信號劑量曲線作為標準曲線進行內(nèi)控品和樣品的定量。

內(nèi)控品
其中，內(nèi)控品是能夠長期使用的、獨立分裝的、特定濃度（高中低）的標準品，是監(jiān)控ELISA實驗在單次實驗中的質(zhì)量和長期的應用過程中不同批次標準品的過渡橋接。

空白對照
空白對照為不含標準品的標準品溶液，基質(zhì)對照則為不含樣品的樣品溶液——兩者可能是一樣的成分，也可能是不同的成分，需要根據(jù)實驗的具體情況進行區(qū)分，目的是確認ELISA體系中是否有非特異的交叉反應。
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